Dithiothreitol (DTT) ھڪڙو عام طور تي استعمال ٿيل گھٽائڻ وارو ايجنٽ آھي، جيڪو پڻ نئين سبز اضافو طور سڃاتو وڃي ٿو.اهو هڪ ننڍڙو ماليڪيولر نامياتي مرڪب آهي جنهن ۾ ٻه مرڪپٽن گروپ (-SH) آهن.ان جي گھٽتائي جي ملڪيت ۽ استحڪام جي ڪري، ڊي ٽي ٽي وڏي پيماني تي بايو ڪيمسٽري ۽ ماليڪيولر حياتيات جي تجربن ۾ استعمال ٿيندو آهي.
ڊي ٽي ٽي جو بنيادي ڪردار پروٽين ۽ ٻين بايومولوڪيولس ۾ ڊسلفائيڊ بانڊ کي گهٽائڻ آهي.ڊسلفائيڊ بانڊ پروٽين جي فولڊنگ ۽ استحڪام جو هڪ اهم حصو آهي، پر ڪجهه تجرباتي حالتن جي تحت، جيئن ته گھٽائي سگهندڙ SDS-PAGE تجزيا، پروٽين جي ٻيهر ٺهڻ ۽ فولڊنگ، ان لاءِ ضروري آهي ته ڊسلفائيڊ بانڊ کي ٻن ٿائل گروپن تائين گھٽايو وڃي. پروٽين.ڊي ٽي ٽي ڊسلفائيڊ بانڊ سان رد عمل ڪري سگھي ٿو انھن کي گھٽائڻ لاءِ مرڪپٽن گروپن ۾، اھڙيءَ طرح پروٽين جي فضائي ڍانچي کي کولڻ ۽ ان کي آسان ڪرڻ ۽ تجزيو ڪرڻ آسان بڻائي ٿو.
ڊي ٽي ٽي پڻ استعمال ڪري سگھجي ٿو اينزيم سرگرمي ۽ استحڪام کي بچائڻ لاء.ڪجھ اينزيم-ڪيٽيليز ٿيل رد عمل ۾، اينزيم جي سرگرمي آڪسائيڊٽ طرفان گھٽجي سگھي ٿي.ڊي ٽي ٽي آڪسيڊنٽ سان رد عمل ڪري سگھي ٿو انھن کي گھٽائڻ لاءِ بي ضرر مادو، اھڙيءَ طرح اينزيم جي سرگرمي ۽ استحڪام کي بچائيندو.
روايتي گھٽائڻ واري ايجنٽ جي مقابلي ۾ جيئن ته β-mercaptoethanol (β-ME)، ڊي ٽي ٽي کي محفوظ ۽ وڌيڪ مستحڪم گھٽائڻ وارو ايجنٽ سمجهيو ويندو آهي.اهو نه رڳو آبي حل ۾ مستحڪم آهي، پر اعلي درجه حرارت ۽ تيزابي بنيادن جي حالتن ۾ ان جي گھٽتائي واري ملڪيت کي پڻ برقرار رکي ٿو.
DTT جو استعمال نسبتا سادو آهي.عام طور تي، ڊي ٽي ٽي هڪ مناسب بفر ۾ ڦهليل آهي ۽ پوء تجرباتي سسٽم ۾ شامل ڪيو ويو آهي.ڊي ٽي ٽي جي بهترين ڪنسنٽريشن کي مخصوص تجربن جي مطابق طئي ڪرڻ جي ضرورت آهي، ۽ عام طور تي 0.1-1 ايم ايم جي حد ۾ استعمال ڪيو ويندو آهي.گھٽ ڪنسنٽريشن سيل جي واڌ تي خراب اثرات کي گھٽائي سگھي ٿو ۽ ٽارگيٽ پروٽين جي اوور ايڪسپريشن جي ڪري سائٽوٽوڪسائيٽي کي گھٽائي سگھي ٿو.وڌيڪ ڪنسنٽريشن شايد سيل جي ميٽابولڪ بوجھ کي وڌائي سگھي ٿي، سيل جي واڌ ۽ اظهار جي ڪارڪردگي کي متاثر ڪري ٿو.
بهترين ڪنسنٽريشن کي طئي ڪرڻ جو طريقو مختلف ڪنسنٽريشن تي IPTG انڊڪشن ٽيسٽ ذريعي ٽارگيٽ پروٽين جي اظهار جي سطح جو اندازو لڳائي سگهجي ٿو.ننڍي پيماني تي ڪلچر ٽيسٽ IPTG ڪنسنٽريشن جي حد تائين استعمال ڪري سگھجن ٿيون (مثال طور 0.1 ايم ايم، 0.5 ايم ايم، 1 ايم ايم، وغيره) ۽ مختلف ڪنسنٽريشن تي اظهار جي اثر جو اندازو لڳائي سگهجي ٿو ٽارگيٽ پروٽين جي اظهار جي سطح کي معلوم ڪندي (مثال طور مغربي. داغ يا فلورسنس جي سڃاڻپ).تجرباتي نتيجن جي مطابق، بهترين اظهار جي اثر سان ڪنسنٽريشن کي بهترين ڪنسنٽريشن طور چونڊيو ويو.
ان کان علاوه، توھان پڻ حوالو ڪري سگھو ٿا لاڳاپيل ادب يا ٻين ليبارٽريز جي تجربي کي سمجھڻ لاءِ عام طور تي استعمال ٿيل IPTG ڪنسنٽريشن رينج کي ساڳي تجرباتي حالتن تحت، ۽ پوءِ تجرباتي ضرورتن جي مطابق اصلاح ۽ ترتيب ڏيو.
اهو نوٽ ڪرڻ ضروري آهي ته مختلف ايڪسپريس سسٽم، ٽارگيٽ پروٽين، ۽ تجرباتي حالتن جي لحاظ کان وڌ کان وڌ ڪنسنٽريشن مختلف ٿي سگهي ٿو، تنهنڪري اهو بهتر آهي ته هر صورت ۾ ڪيس جي بنياد تي بهتر ڪيو وڃي.
تت ۾، ڊي ٽي ٽي هڪ عام طور تي استعمال ٿيل گھٽائڻ وارو ايجنٽ آهي جيڪو پروٽين ۽ ٻين بايوموليڪولس ۾ ڊسلفائيڊ بانڊ کي گهٽائڻ ۽ اينزيم جي سرگرمي ۽ استحڪام کي بچائڻ لاء استعمال ڪري سگهجي ٿو.اهو وڏي پيماني تي بايو ڪيمسٽري ۽ ماليڪيولر حياتيات جي تجربن ۾ استعمال ڪيو ويو آهي.
پوسٽ جو وقت: سيپٽمبر-28-2023