ڊيٿيوٿريٽول (ڊي ٽي ٽي) هڪ عام طور تي استعمال ٿيندڙ گهٽائيندڙ ايجنٽ آهي، جنهن کي نئين سائي اضافي جي نالي سان پڻ سڃاتو وڃي ٿو. اهو هڪ ننڍڙو ماليڪيولر نامياتي مرڪب آهي جنهن ۾ ٻه مرڪپٽن گروپ (-SH) آهن. ان جي گهٽائڻ واري خاصيتن ۽ استحڪام جي ڪري، ڊي ٽي ٽي کي بايو ڪيمسٽري ۽ ماليڪيولر حياتيات جي تجربن ۾ وڏي پيماني تي استعمال ڪيو ويندو آهي.
ڊي ٽي ٽي جو مکيه ڪردار پروٽين ۽ ٻين بايو ماليڪيولز ۾ ڊِسلفائيڊ بانڊ کي گهٽائڻ آهي. ڊِسلفائيڊ بانڊ پروٽين جي فولڊنگ ۽ استحڪام جو هڪ اهم حصو آهي، پر ڪجهه تجرباتي حالتن ۾، جهڙوڪ گھٽائيندڙ SDS-PAGE تجزيو، پروٽين جي ٻيهر ميلاپ ۽ فولڊنگ، پروٽين جي مقامي ڍانچي کي کولڻ لاءِ ڊِسلفائيڊ بانڊ کي ٻن ٿائول گروپن تائين گهٽائڻ ضروري آهي. ڊي ٽي ٽي ڊِسلفائيڊ بانڊن سان رد عمل ڪري سگهي ٿو ته جيئن انهن کي مرڪپٽن گروپن تائين گهٽائي سگهجي، اهڙي طرح پروٽين جي مقامي ڍانچي کي کوليو وڃي ۽ ان جو تجزيو ۽ هٿ چراند آسان بڻائي سگهجي.
ڊي ٽي ٽي کي اينزائم جي سرگرمي ۽ استحڪام کي بچائڻ لاءِ پڻ استعمال ڪري سگهجي ٿو. ڪجهه اينزائم-ڪيٽيلائيزڊ رد عملن ۾، اينزائم جي سرگرمي آڪسيڊنٽ طرفان گهٽجي سگهي ٿي. ڊي ٽي ٽي آڪسيڊنٽ سان رد عمل ڪري سگهي ٿو ته جيئن انهن کي بي ضرر مادن ۾ گهٽائي سگهجي، ان ڪري اينزائم جي سرگرمي ۽ استحڪام کي بچائي سگهجي ٿو.
روايتي گهٽائڻ واري ايجنٽ جهڙوڪ β-mercaptoethanol (β-ME) جي مقابلي ۾، DTT کي هڪ محفوظ ۽ وڌيڪ مستحڪم گهٽائڻ وارو ايجنٽ سمجهيو ويندو آهي. اهو نه رڳو آبي محلول ۾ مستحڪم آهي، پر اعليٰ درجه حرارت ۽ تيزابي بنياد جي حالتن ۾ پنهنجي گهٽائڻ واري خاصيتن کي پڻ برقرار رکي ٿو.
ڊي ٽي ٽي جو استعمال نسبتاً سادو آهي. عام طور تي، ڊي ٽي ٽي کي هڪ مناسب بفر ۾ حل ڪيو ويندو آهي ۽ پوءِ تجرباتي نظام ۾ شامل ڪيو ويندو آهي. ڊي ٽي ٽي جي بهترين ڪنسنٽريشن کي مخصوص تجربي جي مطابق طئي ڪرڻ جي ضرورت آهي، ۽ عام طور تي 0.1-1 ملي ميٽر جي حد ۾ استعمال ڪيو ويندو آهي. گهٽ ڪنسنٽريشن سيل جي واڌ ويجهه تي ناڪاري اثرن کي گهٽائي سگهي ٿي ۽ ٽارگيٽ پروٽين جي اوور ايڪسپريشن جي ڪري سائيٽوٽوڪسيٽي کي گهٽائي سگهي ٿي. وڌيڪ ڪنسنٽريشن سيل ميٽابولڪ بوجھ جو سبب بڻجي سگهي ٿي، سيل جي واڌ ۽ اظهار جي ڪارڪردگي کي متاثر ڪري ٿي.
بهترين ڪنسنٽريشن کي طئي ڪرڻ جو طريقو اهو ٿي سگهي ٿو ته مختلف ڪنسنٽريشن تي IPTG انڊڪشن ٽيسٽ ڪري ٽارگيٽ پروٽين جي اظهار جي سطح جو جائزو ورتو وڃي. ننڍي پيماني تي ڪلچر ٽيسٽ IPTG ڪنسنٽريشن جي هڪ حد استعمال ڪندي ڪري سگهجن ٿا (مثال طور 0.1 mM، 0.5 mM، 1 mM، وغيره) ۽ مختلف ڪنسنٽريشن تي اظهار جي اثر جو جائزو ٽارگيٽ پروٽين جي اظهار جي سطح کي ڳولڻ سان ڪري سگهجي ٿو (مثال طور ويسٽرن بلٽ يا فلوروسينس ڊيٽيڪشن). تجرباتي نتيجن موجب، بهترين اظهار اثر سان ڪنسنٽريشن کي بهترين ڪنسنٽريشن طور چونڊيو ويو.
ان کان علاوه، توهان ساڳئي تجرباتي حالتن ۾ عام طور تي استعمال ٿيندڙ IPTG ڪنسنٽريشن رينج کي سمجهڻ لاءِ لاڳاپيل ادب يا ٻين ليبارٽريز جي تجربي جو حوالو پڻ ڏئي سگهو ٿا، ۽ پوءِ تجرباتي ضرورتن مطابق بهتر ۽ ترتيب ڏئي سگهو ٿا.
اهو نوٽ ڪرڻ ضروري آهي ته بهترين ڪنسنٽريشن مختلف اظهار سسٽم، ٽارگيٽ پروٽين، ۽ تجرباتي حالتن جي لحاظ کان مختلف ٿي سگهي ٿي، تنهن ڪري اهو بهتر آهي ته ڪيس جي بنياد تي بهتر بڻايو وڃي.
مختصر ۾، ڊي ٽي ٽي هڪ عام طور تي استعمال ٿيندڙ گهٽائڻ وارو ايجنٽ آهي جيڪو پروٽين ۽ ٻين بايو ماليڪيولز ۾ ڊسلفائيڊ بانڊ کي گهٽائڻ ۽ اينزائم جي سرگرمي ۽ استحڪام کي بچائڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو. اهو بايو ڪيمسٽري ۽ ماليڪيولر بائيولاجي تجربن ۾ وڏي پيماني تي استعمال ڪيو ويو آهي.
پوسٽ جو وقت: سيپٽمبر-28-2023